黄芪提取物

　　【产品别名】：棉芪，黄耆，独椹，蜀脂，百本，百药棉，黄参，血参，人衔等

　　【英文名称】：Total saponins of astragalus;ASTRAGALUS P.E.;Astragasli P.E;Astragalus Ext;Astragalos Extract;Astragalus Root P.E;Astragalus/Bay Chi Extract;AstraglusP.E

　　【使用部位】：黄芪Astralgus membranceus(Fisch)Bge Var.mongholicus(Bye)Hsiao干燥的根

　　【主要成分】：多糖

　　【原料来源】：膜荚黄芪主要分布于我国黑龙江、辽宁、内蒙古、河北、山东、山西、陕西、宁夏、甘肃、青海、新疆、四川以及云南等省区，蒙古、朝鲜、俄罗斯也有分布。商品黄芪卜奎芪主要分布于大兴安岭地区、嫩江、爱珲、孙吴等县、内蒙古莫力达瓦旗，宁古芪主要分布于黑龙江省宁安、东宁、林口、穆棱、海林，正古芪主要分布于河北、张家口一带。

　　蒙古黄芪主要分布于我国吉林、河北、山西和内蒙古等地，蒙古和俄罗斯也有分布。

　　我国黄芪野生资源已较少，膜荚黄芪和蒙古黄芪均被列入国家三级重点保护种类。目前药材主要为栽培品种，主产于山西的浑源、繁峙、应县、代县、广灵，内蒙古的固阳、武川、卓资，黑龙江和吉林等地。

　　【化学成分】：

　　黄酮类：蒙古黄芪根含槲皮素、山柰酚、异鼠李素、鼠李柠檬素、芒柄花黄素(Formononentin)、毛蕊异黄酮(Calycosin)、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酰酯、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-O-葡萄糖苷、(6aR，11aR)-3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀素、(6aR，11aR)-3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷、(3R)-7，2-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、(3R)-7，2′-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷、(3R)-2′，3′-二羟基-7，4′二甲氧基异黄酮、(6aR，11aR)-10-羟基-3，9-二甲氧基紫烷、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酰酯、紫檀素葡萄糖苷-6′-O-丙二酰酯、异黄烷葡萄糖苷-6′-O丙二酰酯。

　　2.皂苷类：膜荚黄芪中含有膜荚黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ(AstramembranninⅠ、Ⅱ)、黄芪皂苷Ⅰ～Ⅷ(AstragalosideⅠ～Ⅷ)、大豆皂苷(SoyasaponinⅠ)，其中膜荚黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅳ为同一化合物，即黄芪甲苷(AstrasieversianinⅫ)。蒙古黄芪中含黄芪苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ，以及胡萝卜苷等。

　　3.多糖类：蒙古黄芪中含黄芪多糖Ⅰ-Ⅲ(AstragalanⅠ-Ⅲ，APS1，2，3)，萄聚糖AG-1、AG-2、杂多糖AH-1、AH-2等。

　　4.氨基酸类：以脯氨酸为主，还有γ-氨基丁酸、天冬酰胺、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、甘氨酸、丝氨酸等。

　　5.有机酸类：主要有阿魏酸、异阿魏酸、对羟基苯丙烯酸、咖啡酸、氯原酸、棕榈酸、亚麻酸和亚油酸等。其他还有微量元素、核黄素、叶酸、维生素P、谷甾醇、羽扇豆醇、正十六醇等。

　　【薄层鉴别方法】：

　　方法一：取相当于5g药材的提取物样品，用100ml乙醇—水(57：43)混合液超声提取10min，过滤，滤液在45℃的真空下浓缩，浓缩液用10ml乙酸乙酯与水的混合液(1：1)脱脂，弃去上层液，下层液用乙酸乙酯萃取2次，每次5ml，弃去乙酸乙酯层，水层用正丁醇萃取3次，每次5ml，合并正丁醇萃取液，再用水洗涤3次，每次2ml，在真空下挥去正丁醇，残渣用1 ml甲醇溶解，即为供试品溶液。1mg黄芪苷Ⅳ用1ml甲醇溶解，即为对照品溶液。使用自动薄层点样器，吸5μl待测液与对照液点于10×10cm硅胶60F254HPTLC板上，成8mm大小的斑点，两点间距为6mm，基线距板底8mm。置10×10cm展开槽(先用5ml展开剂饱和10min)，以氯仿-甲醇-水(18：8：1)为展开剂，展开至距下板边缘55mm，在冷空气中放置5min使板自然干燥。在254nm、366nm下检视；将板在硫酸试剂(将5ml硫酸加入到95ml冰冻的甲醇中)中浸渍1秒钟，冷空气中干燥，110℃加热2min，在紫外366nm下检测衍生板。

　　方法二：取黄芪药材粉末3g或相当量的提取物，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径10～15mm)上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述二种溶液各2μl，分另点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13：7：2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，在日光下显相同的棕褐色斑点；紫外灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。

　　【产品规格】：10%多糖10:1，20:1

　　【检测方法】

　　黄芪多糖的检测方法

　　保健食品中水溶性粗多糖的测定方法

　　1.范围

　　本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。

　　本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。

　　本方法最低检出浓度：5.0mg/L。

　　本方法最佳线性范围：5.0ug/mL—200ug/mL。

　　2.原理

　　食品中分子量>10000的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。

　　原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

　　3．试剂

　　本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

　　3.1 乙醇溶液(80%):20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。

　　3.2 氢氧化钠溶液(100g/L):称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。

　　3.3 铜试剂储备液:称取3.0gCuSO4.5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀备用。

　　3.4 铜试剂溶液：取铜储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。

　　3.5 洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液，10mL氢氧化钠溶液，混匀，临用新配。

　　3.6 硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。

　　3.7 苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存一月。

　　3.8 葡萄糖标准储备溶液:精密称在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖标准0.5000g，加溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。

　　3.9 葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准储备液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。

　　4．仪器

　　4.1 分光光度计

　　4.2 离心机

　　4.3 旋转混匀器

　　5.分析步骤

　　5.1 标准曲线制备:

　　精密吸取葡萄糖标准使用液0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL(相当于葡萄糖，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10mg)分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min.，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　5.2 试样处理

　　5.2.1 试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。

　　5.2.2 沉淀粗多糖:精密取5.2.1滤液5.0mL或液体试样5.0mL，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min.，以3000rpm离心5min.，弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复3—4次操作。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀，供沉淀葡聚糖。

　　5.2.3 沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL，铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min.，冷却后以3000rpm离心5min.，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心，弃去上清液，反复3次操作，残渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并转移至50mL容量中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

　　5.3 试样测定:精密吸取试样测定液2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0 mL，在旋转混匀器上混匀后，小心加入浓硫酸10.0mL后于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min.，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算试样中水溶性粗多糖含量。同时作试样空白实验。

　　5．4 分析结果表述

　　试样中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）计算。

　　5．4．1 计算

　　式中:

　　x—试样中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖计)，mg/g;

　　m1---试样测定液中葡萄糖的质量，mg;

　　m2---试样空白液中葡萄糖质量，mg;

　　m---试样质量，g;

　　V1---试样提取液总体积，mL;

　　V2---沉淀粗多糖所用试样提取液体积，mL;

　　V3---粗多糖溶液体积，mL;

　　V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积，mL;

　　V5--试样测定液总体积，mL;

　　V6---测定用试样测定溶液体积，mL。

　　5．4．2 结果表示

　　计算结果保留两位有效数字。

　　6.技术参数

　　回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为87.8～110.8%。

　　精密度：同一试样10次测定结果的RSD为5.8%。

　　干扰因素：测定过程中避免碳水化合物的玷污干扰。